Журнал о Медицине
rss новости rss статьи rss все архив
Словарь научных терминов

Эдмана деградация

ЭДМАНА ДЕГРАДАЦИЯ, определение первичной структуры белков и пептидов путем последоват. (ступенчатого) расщепления их пептидных связей (начиная с N-конца молекулы) действием фенилизотиоцианата:

http://www.pora.ru/image/encyclopedia/9/9/7/17997.jpeg

Р-цию осуществляют при рН 9 и т-ре 40 °С. В результате образуется производное 2-анилино-5-тиазолинона (ф-ла I) и белок (пептид), укороченный на один остаток аминокислоты.
Относительно неустойчивое производное 2-анилино-5-тиазолинона непригодно для идентификации аминокислоты. Оно м. б. превращено в изомерный 1-фенилимидазолидин (тиогидантоин; II) при нагр. в кислой среде или путем гидролиза (с размыканием цикла и послед. циклизацией):

http://www.pora.ru/image/encyclopedia/9/9/8/17998.jpeg

Соед. II экстрагируется и м. б. идентифицировано с помощью бумажной, тонкослойной или газожидкостной хрома-тографии. Количественно это соед. можно определить спектрофотометрически при 265-270 нм. Оставшийся белок (пептид) выделяется и подготавливается к следующему циклу деградации.
Значение Э. д. возросло в связи с возможностью осуществлять все стадии р-ции в спец. приборе - секвенаторе (от англ. sequence - последовательность; см. также Белки)в автоматич. режиме. Для этого белок (пептид) в виде тонкой пленки распределяют на внутр. пов-сти стенки вращающегося сосуда. Все необходимые реагенты поступают на его дно. Образующееся на каждой стадии производное 2-анилино-5-тиазолинона собирается отдельно с помощью коллектора фракций для послед. идентификации. Для определения состава аминокислотных остатков в белке (пептиде) достаточно менее 1 мг продукта.
Созданный в 1966 П. Эдманом с использованием этих принципов прибор и применение масс-спектрометра в сочетании с ЭВМ позволяют полностью автоматизировать процесс определения первичной структуры макромолекул.
Среди модификаций Э. д. широкое применение нашел метод с использованием дансилхлорида (ДНС; 1-диметиламинонафталин-5-сульфохлорид) - т. наз. метод ДНС-Эдмана. Он основан на р-ции ДНС с непротонированнойhttp://www.pora.ru/image/encyclopedia/9/9/9/17999.jpeg-аминогруппой N-концевой аминокислоты белка (пептида) с образованием дансил-белка (пептида), к-рый на следующей стадии гидролизуют с освобождениемhttp://www.pora.ru/image/encyclopedia/0/0/0/18000.jpeg-ДНС-аминокислот (последние обладают интенсивной флуоресценцией,http://www.pora.ru/image/encyclopedia/0/0/1/18001.jpeg 365 нм). Модификация предложена В. Греем и Б. Хартли в 1963 и также реализована в автоматич. приборах, в т. ч. твердофаз-ных секвенаторах, в к-рых белок ковалентно связан с полимерным носителем.
Р-ция предложена П. Эдманом в 1950.

Лит.: Общая органическая химия, пер. с англ., т. 10, М., 1986, с. 266-67; Овчинников Ю.А., Биоорганическая химия, М., 1987, с. 57-67; Ed-man P., "Acta Chem. Scand.", 1950, v. 4, № 2, p. 277-82; Folkers К. [а. о.], "Angew. Chem. Internal. Edn.", 1973, v. 12, № 4, p. 255. В. В. Баев.


Здоровье и профилактика Акушерство и гинекология Стоматология Красота Зрение Энциклопеди Адреса Реклама
Видео